Validar los efectos beneficiosos de una formulación prototipo, basada en nuevas cepas probióticas aisladas a partir de leche de perros, para reducir y complementar el uso de antibióticos durante el tratamiento de diarreas bacterianas agudas en mascotas.

- Completar la caracterización del banco de cepas probióticas actualmente identificadas, definiendo específicamente sus capacidades de inhibición del crecimiento de cepas patógenas y su efecto inmunoestimulador, así como posibles efectos sinérgicos. Descripción: Se completará la caracterización funcional de las cepas aisladas de leche en base a la resistencia a pH ácido, NaCl, sales biliares, pancretina, a su actividad inhibitoria sobre las cepas patógenas (E. coli enterotoxigénica, C. perfringens y Salmonella sp.) y a su capacidad de agregación in vitro en cultivos microbianos y en cultivos artificiales de tejidos. Se evaluará la capacidad inmuno moduladora en modelos murinos, determinado la estimulación de citoquinas pro-inflamatorias después de una administración con las cepas en estudio. Las cepas seleccionadas se identificarán mediante secuenciación total para garantizar identidad genética de los microorganismos presentes en la formulación. - Diseñar y desarrollar una formulación prototipo para la administración de las cepas probióticas por vía oral en perros. Descripción: A partir de estudios previos desarrollados en nuestro laboratorio para el cultivo artificial de cepas probióticas de aplicación en humano hemos establecido condiciones iniciales para el cultivo de cepas bacterianas en fermentador de 10 L. Se ajustarán las condiciones de cultivo de nuestras cepas en base a los parámetros previamente establecidos y se aislará la biomasa para evaluar dos métodos de microencapsulación: secado por atomización y liofilización. Para cada método se ensayarán diferentes formulaciones que permitan establecer la mejor condición de encapsulación. Dentro de los materiales a utilizar están: inulina, maltodextrina, alginato de sodio, sacarosa, fructooligosacáridos y quitosano. Para cada alternativa, ya sea por si sola o en mezclas, se evaluará la viabilidad con respecto al recuento inicial y estabilidad de las formulaciones en el tiempo. - Validar a escala de laboratorio clínico veterinario los efectos beneficiosos de la formulación prototipo desarrollada como tratamiento complementario al uso de antibióticos en modelo canino, con criterios de inclusión para pacientes con diarrea bacteriana aguda de entre 2 a 8 años de edad. Descripción: Para validar el efecto de la formulación probiótica se realizará un ensayo previo de inocuidad en ratones y citotoxicidad celular en cultivos artificiales de tejidos con diferentes dosis de la formulación probiotica (106 a 109 UFC/g). Posteriormente se realizará un ensayo comparativo en perros administrando el probiótico en pacientes con diarrea bacteriana aguda, tomando criterios de inclusión en el ensayo que comprenden: edad de 2 a 8 años, signo clínicos de buen ánimo, vómitos leves, diarrea, parvovirus negativo, perfil bioquímico negativo a falla hepática. Se realizarán análisis de sangre en el que debe haber un recuento elevado de neutrófilos para descartar un cuadro viral y un recuento normal de eosinófilos para descartar una patología parasitaria. Además se debe realizar pesquisa de Clostridium botulinum para descartar que la DBA tenga un origen en el consumo de alimentos descompuestos. Los animales serán seleccionados para el estudio previa firma de un documento de consentimiento informado por parte del dueño. Los pacientes seleccionados recibirán diferentes tratamientos, un grupo recibirá el tratamiento rutinario (antibiótico de amplio espectro como el metronidazol en la dosis recomendada) y será considerado control de antibiótico, otro grupo será tratado con el antibiótico de amplio espectro y probiótico de referencia en el mercado como el BioPower (DragPharma) y finalmente un tercer grupo será tratado con el antibiótico y nuestra formulación, tomando como referencia una dosis equivalente. Se monitorearán los animales con hemograma y perfil bioquímico, signos clínicos, consistencias de las heces, recuperación del apetito y recuento de patógenos. Los pacientes serán analizados en el día 4 de tratamiento y en el día 7, con el fin de establecer si nuestra formulación favorece la recuperación de las mascotas en tiempos menores a los otros tratamientos estudiados.